1、什么是定標(生化儀測定原理)朗伯-比爾定律是生化儀的理論基礎，樣本+試劑進(jìn)行反應，測得的是吸光度(A)，需要轉化成濃度(或者活力單位)才有臨床意義。因此需要建立濃度(或活力單位)和吸光度之間的關(guān)系。定標，即測定已知濃度(或活力單位)的校準品，根據生化儀測得的吸光度，進(jìn)行擬合，得到濃度和吸光度之間的關(guān)系曲線(xiàn)---校準曲線(xiàn)，將樣本+試劑反應的吸光度帶入校準曲線(xiàn)，就可以得到濃度。(如下圖所示)

　　2、生化試劑的相關(guān)基礎(上機要點(diǎn))參數設置內容：波長(cháng)(主副波長(cháng))，反應時(shí)間、樣品量、試劑量、讀點(diǎn)時(shí)間、反應方向、分析方法、校準方法、校準濃度等。3、生化反應的監測根據反應類(lèi)型的不同，曲線(xiàn)被分為反應曲線(xiàn)、校準曲線(xiàn)等。(下圖是反應曲線(xiàn)示例)

　　反應曲線(xiàn)的縱坐標為吸光度值，橫坐標為反應時(shí)間。反應時(shí)間即測光點(diǎn)，當一個(gè)反應杯通過(guò)一次光度計光路時(shí)，就會(huì )被測定一次吸光度，兩次通過(guò)光路的間隔就是一次讀點(diǎn)時(shí)間，也可以說(shuō)反應盤(pán)旋轉一圈所用的時(shí)間。反應曲線(xiàn)是反應監測的主要信息內容。在反應曲線(xiàn)上能看到樣品、試劑加入時(shí)的時(shí)間、對應吸光度。除反應曲線(xiàn)監測外，平時(shí)還有試劑空白監測，查看試劑空白吸光度。校準曲線(xiàn)是反映校準的過(guò)程，并為計算結果提供依據。校準曲線(xiàn)根據校準方法分為線(xiàn)性曲線(xiàn)和非線(xiàn)性曲線(xiàn)兩種;根據校準點(diǎn)的多少分為單點(diǎn)線(xiàn)性曲線(xiàn)和多點(diǎn)線(xiàn)性非線(xiàn)性曲線(xiàn)。(下圖是校準曲線(xiàn))

　　校準曲線(xiàn)的縱坐標是吸光度軸，橫坐標是濃度軸。線(xiàn)性曲線(xiàn)有一點(diǎn)或多點(diǎn)，過(guò)零點(diǎn)和不過(guò)零點(diǎn)多種。非線(xiàn)性曲線(xiàn)一般都是多點(diǎn)，有樣條曲線(xiàn)(Spline)、對數曲線(xiàn)(Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P)、函數曲線(xiàn)、折線(xiàn)曲線(xiàn)等。在參數正確的情況下，校準曲線(xiàn)的每個(gè)點(diǎn)是校準品和相應試劑反應后的結果。校準曲線(xiàn)結果與校準方法的選擇，會(huì )直接影響結果的準確和穩定。4、定標影響因素①重復性不好校準品沒(méi)有混勻或者試劑穩定性較差，可通過(guò)精密度實(shí)驗排查原因。②校準類(lèi)型根據校準品濃度和吸光度之間呈現的關(guān)系，選擇合適的校準類(lèi)型。如果校準品濃度和吸光度呈線(xiàn)性關(guān)系，則不建議使用樣條函數擬合;Logit雙對數函數3P、4P、5P，雖然都是“收斂型”函數，但是收斂程度不一樣，根據收斂程度確定合適的雙對數函數校準類(lèi)型。③校準品濃度校準品濃度如果設置不合理，有可能擬合結果較差，導致點(diǎn)不在校準曲線(xiàn)上，定標回測較差。